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    Western低背景封閉及抗體增敏稀釋液
    所屬分類:western實驗應用試劑相關產品

    產品型號:Western低背景封閉及抗體增敏稀釋液

    在western實驗中,提高一抗和二抗的濃度,可有效的提高檢測的靈敏度,并降低抗體孵育時間。而與此同時背景會相應提高,甚至將檢測信號淹沒在背景信號中。對于使用過的抗體,保存在奶粉溶液或BSA溶液中,很容易造成抗體的失活,并極易染菌變質。

    產品介紹
    Western低背景封閉及抗體增敏稀釋液使用說明書 (初次使用本產品請仔細閱讀本說明書)
            在western實驗中,提高一抗和二抗的濃度,可有效的提高檢測的靈敏度,并降低抗體孵育時間。而與此同時背景會相應提高,甚至將檢測信號淹沒在背景信號中。對于使用過的抗體,保存在奶粉溶液或BSA溶液中,很容易造成抗體的失活,并極易染菌變質。 培清科技開發的本產品,可有效實現western的快速,低背景封閉,并可有效提升抗原抗體反應速度,提高western靈敏度。您在不改變原有操作和試驗系統的前提下,通過本產品可提高數十倍靈敏度(親和力低的抗體提高的倍數更高)。本產品成分不影響磷酸化,乙?;贵w檢測,不影響過氧化物酶和堿性磷酸酶活性,適合熒光,發光,顯色等檢測。另外本產品允許室溫存放和操作,不含有有毒物質如疊氮納,硫柳汞鈉。 本產品可單獨使用,也可配合培清科技的另一個產品膜處理液,western靈敏度將進一步提升。 使用膜處理液后,需用漂洗液或去離子水漂洗3次,每次5分鐘。然后再進行封閉。 包裝規格: 100ml 一瓶 (室溫避光保存,保存期1年,如產生微弱沉淀,不影響使用) 操作說明: 本產品的操作及抗體孵育與傳統的奶粉溶液和BSA溶液一致,但封閉時間推薦10min-20min(可以但無需更長時間封閉), 封閉后可直接加入抗體進行后續試驗。 參考信息:根據培清科技實驗發現,在不影響背景的情況下,抗體濃度每提高一倍,檢測靈敏度提高一倍,抗原抗體(包括一抗二抗)的固液兩相反應在4℃真正達到反應平衡需要48h,但在前4個小時里基本可實現70%的結合量,所以即使再加大孵育時間10倍其靈敏度提升也非常有限度。在抗體濃度和孵育時間基本確定的情況下,要想繼續大幅度提高檢測靈敏度,就需要依賴二抗HRP的活性,及發光底物的靈敏性,培清科技開發了應該是目前市面上最靈敏的HRP發光液,其靈敏度超出thermo最好質量發光液的4倍,millipore的16倍,比pierce普通級發光液高出250倍(客戶可簡單將二抗倍比稀釋后點在NC膜上進行曝光檢測),所以在同樣條件下,如果用pierce的普通發光液可以檢測10pg抗原,那么利用培清科技的超敏發光液則可檢出0.04pg抗原。另外,還有兩個因素影響抗體靈敏性,一是抗原抗體的可結合性,這不僅取決于抗體的濃度和親和力,還取決于膜上抗原的狀態,培清科技開發的膜處理液及本封閉液(尤其是前者)可有效降低抗原表面自由能,使得抗原抗體更容易誘導契合。另一個影響因素就是背景,尤其是在使用高靈敏發光底物時,背景問題尤為突出,培清科技發現,微弱背景可大幅提升靈敏度,而過高背景則使正常信號淹沒于背景之中。培清科技的此低背景封閉液可使WB獲得高信噪比。
    效果展示:

    上下兩圖為相同的含GST融合蛋白的大腸桿菌裂解物,5倍倍比稀釋的western結果。上圖用傳統的5%奶粉溶液進行的western封閉和抗體稀釋,下圖用本試劑操作,反應條件完全一樣,如一起洗滌,同時孵育,一起曝光等。